I-Blue 中量质粒提取试剂盒(无内毒素)使用预装的阴离子交换树脂柱从50-150 ml培养的细菌中纯化质粒DNA。试剂盒中包含I-Blue裂解缓冲液 Lysis Buffer(可选的颜色指示),以防止常见的操作错误,从而确保有效的细胞裂解和SDS沉淀。在重新悬浮步骤中添加了I-Blue裂解缓冲液,然后添加了PM2缓冲液。加入PM2缓冲液后,在混合过程中,样品将*变成蓝色时,样品将开始变成蓝色。无色区域或棕色团块表明裂解不*,应继续混合直至样品*变蓝。在中和步骤中,添加PM3缓冲液,剧烈摇动试管将开始使样品变回中性色。一旦样品*无色,中和就完成了。现在可以添加PER缓冲液以去除内毒素。现在可以完成纯化质粒DNA的结合,洗涤和洗脱。
由于分离柱的高效率,整个过程无需超速离心机,HPLC或其他有毒试剂,即可在80分钟内完成。纯化的质粒DNA适用于转染,测序反应,酶连接,PCR,体外转录,显微注射,限制性内切酶切和基因枪。
通过从50 ml过夜培养的E.coli(DH5α)中分离质粒DNA,逐批测试了无内毒素质粒提取试剂盒的质量。大肠杆菌(DH5α)培养物,含有pBluescript(A600> 2U / ml)。经过纯化过程,产量超过250 µg,A260 / A280比在1.8-2.0之间。纯化的质粒(1 µg)用于EcoRI消化,并通过电泳进行分析。
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