动物源性DNA检测试剂盒是为专业的高通量实验室设计的,但是现在这种试剂盒是适合中低等通量的实验室使用,这个试剂盒专门为每天需要制备的样品量达到100个的实验室而设计。
该试剂盒在连接探针末段引入不同长度的标签序列,获得长度各异的目的探针连接产物,利用荧光标记的通用引物对连接产物进行PCR扩增,通过荧光毛细管电泳对扩增产物进行电泳分离检测,后通过对电泳图谱的分析获取各个位点的峰高,进而对样品目的区域的拷贝数进行分析。
动物源性DNA检测试剂盒的渗透压很低(<20mosm/kgH2O),粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
整个检测过程应严格分在三区进行:PCR反应体系的配制区;标本处理、加样区;PCR扩增、荧光检测及结果分析区。各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立。实验后即请清洁工作台,并进行消毒。
使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换)、一次性离心管、自卸式移液器和带滤嘴吸头。
每次实验应设置阴阳性对照品,试剂准备和标本处理应使用超净工作台(负压式)或防污染罩,以防止对环境污染。
操作人员应经过专业培训,具有一定经验和操作技能。
操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或70%酒精、紫外线灯或臭氧消毒处理。
实验中用过的吸头、扩增完毕的离心管、标本和其它废弃物品一同灭菌后丢弃于地点。
试剂使用前应在室温下充分融化并混匀。