荧光定量PCR的检测离不开荧光定量PCR试剂和
qPCR荧光定量PCR仪，仪器由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。
对于荧光定量PCR仪的评价，相信大家一定是不知道的。荧光定量PCR仪涉及很多温度、光电信号等，专业性评估，还有就是不知道从哪里入手。今天我们梳理下在核酸检测实验室中如何通过试验来评价荧光定量PCR仪。
qPCR荧光定量PCR仪的试验设计：
一、试验准备
1、有证标准物质：国内外有证标准物质，标准物质类型为质粒DNA或RNA。不推荐使用自制没有进行定量的质控品。
2、荧光染料：可以选用试剂盒自带的ROX染料或购买标准荧光染料。
3、荧光定量PCR方法：需要使用经过验证过的荧光定量方法，扩增效率90%-110%（越接近100%越好）；R2大于0.99；检测限应低于10copies/反应。
4、反应体系：质量高口碑好的反应体系。
5、耗材：仪器推荐使用的专用于荧光定量PCR的耗材。
6、反应条件：常规荧光定量PCR反应条件，普通模式，40个循环。不建议使用快速模式和预扩增反应条件。
二、重复性试验
选择高中低浓度标准物质进行检测（推荐浓度为5000copies/反应、500copies/反应和50copies/反应），每个浓度至少5次重复，样品管随机放置在反应板中心和边缘的不同位置。Ct值变异系数不大于3%。
如果qPCR荧光定量PCR仪检测中使用双重或多重荧光检测，可设计如用FAM探针扩增用VIC通道检测，检测结果不应该有高于阈值线的荧光信号。
